Detección molecular de ToBRFV mediante RT-qPCR
LoopSense™ Q ToBRFV es un kit molecular diseñado para la detección cualitativa de Tomato brown rugose fruit virus —ToBRFV— mediante RT-qPCR en tiempo real.
ToBRFV es un virus de importancia para los cultivos de tomate y pimiento. Su detección molecular permite analizar material vegetal y confirmar la presencia del objetivo mediante una reacción específica con sonda fluorescente.
El kit se presenta en formato liofilizado para facilitar su preparación, manipulación, transporte y conservación.
Características principales
- Detección específica de ToBRFV.
- Tecnología One-Step RT-qPCR en tiempo real.
- Reactivos en formato liofilizado.
- Detección mediante sonda fluorescente.
- Lectura de la señal del objetivo en el canal FAM.
- Protocolo de amplificación simplificado.
- Compatible con termocicladores qPCR que dispongan de canal FAM.
- Aplicable a extractos de muestras vegetales preparados conforme al IFU.
- Uso exclusivo para investigación — RUO.
Uso previsto
LoopSense™ Q ToBRFV está destinado al análisis molecular cualitativo de ToBRFV en extractos de material vegetal y en otras matrices previamente verificadas por el laboratorio usuario.
Los resultados deben interpretarse junto con los controles incluidos en cada ejecución y de acuerdo con los criterios establecidos en las instrucciones de uso.
Tipos de muestra
El ensayo puede utilizarse con RNA previamente extraído de materiales como:
- Hojas.
- Cotiledones.
- Brotes y pecíolos.
- Plántulas.
- Semillas y material vegetal de propagación.
- Plantas madre.
- Otros tejidos vegetales previamente verificados por el laboratorio.
La calidad del resultado depende de la representatividad de la muestra, la eficacia de la extracción de RNA y la ausencia de inhibidores de la amplificación.
Tecnología RT-qPCR
ToBRFV es un virus de RNA. Por este motivo, el ensayo incorpora una etapa inicial de transcripción inversa para generar ADN complementario antes de la amplificación mediante PCR en tiempo real.
La detección se realiza mediante primers y una sonda fluorescente específicos para ToBRFV. La señal correspondiente al objetivo se registra en el canal FAM.
Presentación del producto
El producto se suministra con los reactivos específicos necesarios para la amplificación y detección de ToBRFV.
El número de reacciones, controles y componentes incluidos depende de la presentación seleccionada.
Los kits de extracción, consumibles y equipos de PCR en tiempo real se suministran por separado, salvo que se indique expresamente lo contrario.
Compatibilidad
LoopSense™ Q ToBRFV es compatible con equipos de PCR en tiempo real que permitan:
- Lectura de fluorescencia en el canal FAM.
- Programación de una etapa inicial de transcripción inversa.
- Programación de hasta 45 ciclos de amplificación.
- Adquisición de fluorescencia durante el paso de 60 °C.
- Uso del volumen de reacción indicado en el IFU.
- Utilización de tubos, tiras o placas compatibles con el equipo.
Antes de transferir el ensayo a una nueva plataforma debe verificarse la compatibilidad térmica, óptica y física del termociclador.
Flujo de trabajo
- Recoger y preparar la muestra vegetal.
- Extraer el RNA mediante un procedimiento compatible.
- Preparar los controles y las muestras.
- Reconstituir los reactivos liofilizados siguiendo el IFU.
- Añadir el extracto de RNA a la reacción.
- Configurar el programa de RT-qPCR.
- Realizar la amplificación y adquirir la fluorescencia en el canal FAM.
- Comprobar el comportamiento de los controles.
- Interpretar las curvas de amplificación y los valores de Cq.
Controles del ensayo
Cada ejecución debe incluir los controles necesarios para comprobar el funcionamiento correcto del análisis:
- Control positivo de ToBRFV.
- Control negativo de amplificación.
- Control negativo de extracción, cuando proceda.
- Control interno de extracción o amplificación, cuando esté incluido.
- Muestras objeto de análisis.
La ejecución solamente debe considerarse válida cuando los controles cumplen los criterios establecidos en el IFU.
Interpretación de resultados
La presencia o ausencia de ToBRFV debe evaluarse mediante el análisis de las curvas de amplificación y la comparación con los controles del ensayo.
La interpretación debe considerar:
- La amplificación correcta del control positivo.
- La ausencia de señal específica en el control negativo.
- El comportamiento del control interno, cuando se utilice.
- La forma y consistencia de la curva de amplificación.
- El valor de Cq obtenido para la muestra.
- Los criterios de aceptación establecidos en el IFU.
Un resultado negativo no excluye completamente la presencia del virus cuando la muestra no es representativa, la concentración del objetivo está por debajo del límite de detección, la extracción de RNA es insuficiente o existen inhibidores.
Documentación técnica
Consulta las instrucciones de uso para conocer la preparación de la reacción, el programa térmico, los controles y los criterios de interpretación.
Preguntas frecuentes
¿Qué detecta LoopSense™ Q ToBRFV?
El ensayo detecta secuencias específicas de Tomato brown rugose fruit virus mediante RT-qPCR en tiempo real.
¿Qué canal de fluorescencia utiliza?
La señal correspondiente al objetivo ToBRFV se detecta en el canal FAM.
¿Necesita una etapa de retrotranscripción?
Sí. ToBRFV es un virus de RNA, por lo que el programa incluye una etapa inicial de transcripción inversa.
¿El kit incluye la extracción de RNA?
No, salvo que la presentación comercial indique expresamente lo contrario. El ensayo se utiliza con RNA previamente extraído y purificado.
¿Puede utilizarse con semillas?
Puede aplicarse a RNA extraído de semillas y material vegetal de propagación cuando el procedimiento de muestreo y extracción haya sido verificado por el laboratorio.
¿Puede analizarse material vegetal sin síntomas?
Sí. El análisis molecular puede utilizarse con material aparentemente asintomático, siempre que el muestreo sea representativo y la concentración del objetivo sea suficiente.
¿Es compatible con cualquier equipo de qPCR?
Puede utilizarse en plataformas abiertas compatibles con el programa térmico, el canal FAM, el volumen de reacción y los consumibles indicados en el IFU.
Producto destinado exclusivamente a investigación — Research Use Only (RUO). No destinado a procedimientos diagnósticos en humanos o animales.
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