Kit RT-qPCR para detectar CYVCV en cítricos
LoopSense™ Q CYVCV es un kit de RT-qPCR one-step/one-tube desarrollado para la detección cualitativa de Citrus yellow vein clearing virus (CYVCV) en muestras vegetales de cítricos.
CYVCV, cuyo nombre taxonómico aceptado es Potexvirus citriflavivenae, es el agente asociado a la clorosis nervial amarilla de los cítricos.
Las plantas infectadas pueden presentar aclaramiento de los nervios foliares, deformaciones, amarilleamiento, reducción del vigor o alteraciones en los frutos. Sin embargo, también pueden existir plantas infectadas sin síntomas claramente reconocibles.
La detección mediante RT-qPCR permite analizar material vegetal independientemente de la presencia o ausencia de síntomas visibles.
¿Qué detecta LoopSense™ Q CYVCV?
El kit está diseñado para detectar RNA de:
- Citrus yellow vein clearing virus.
- CYVCV.
- Potexvirus citriflavivenae.
- Virus de la clorosis nervial amarilla de los cítricos.
La reacción utiliza primers y una sonda fluorescente dirigidos contra una región conservada del genoma viral.
La señal específica de CYVCV se registra en el canal FAM.
Principales aplicaciones
LoopSense™ Q CYVCV puede utilizarse en:
- Análisis de plantas de limonero.
- Análisis de lima y otros cítricos.
- Control de plantas madre.
- Control de material vegetal de propagación.
- Análisis de plantas de vivero.
- Programas de vigilancia de CYVCV.
- Investigación sobre virus emergentes de cítricos.
- Estudios epidemiológicos.
- Evaluación de plantas sintomáticas.
- Screening de plantas aparentemente asintomáticas.
- Confirmación molecular de muestras sospechosas.
- Seguimiento de colecciones y bancos de germoplasma.
Tipos de cítricos analizables
El ensayo está diseñado para su utilización con muestras procedentes de:
- Limonero.
- Lima.
- Naranjo dulce.
- Naranjo amargo.
- Mandarino.
- Pomelo.
- Citrón.
- Portainjertos de cítricos.
- Híbridos y otras especies del género Citrus.
Tipos de muestra
Puede utilizarse RNA previamente extraído de:
- Hojas jóvenes.
- Hojas maduras.
- Nervios foliares.
- Pecíolos.
- Brotes.
- Corteza de ramas.
- Tallos maduros.
- Plantas madre.
- Material de vivero.
- Material vegetal de propagación.
Debido a que la distribución del virus dentro de la planta puede ser irregular, se recomienda tomar material de diferentes orientaciones y partes de la planta.
Para el análisis de plantas aparentemente asintomáticas es aconsejable utilizar una muestra compuesta que incluya pecíolos, nervios foliares y tejido procedente de varios brotes.
Tecnología One-Step RT-qPCR
CYVCV es un virus de RNA. Por este motivo, el análisis incluye una etapa inicial de retrotranscripción.
LoopSense™ Q CYVCV combina en un único tubo:
- Retrotranscripción del RNA viral.
- Amplificación del ADN complementario.
- Detección específica mediante una sonda fluorescente.
La integración de estas etapas en una única reacción simplifica el flujo de trabajo y reduce el número de manipulaciones.
Reactivos liofilizados
Los reactivos LoopSense™ se suministran en formato liofilizado y están preparados para su reconstitución antes del análisis.
Ventajas del formato liofilizado
- Facilita la preparación de la reacción.
- Favorece la estandarización entre análisis.
- Reduce el número de pasos de pipeteo.
- Disminuye el riesgo de errores de preparación.
- Facilita el transporte y almacenamiento del producto.
- Permite utilizar tubos individuales.
- Facilita el análisis de pocas muestras sin desperdiciar una placa completa.
- Reduce los ciclos de congelación y descongelación de los reactivos.
Equipos compatibles
LoopSense™ Q CYVCV está diseñado para utilizarse en equipos de PCR en tiempo real de plataforma abierta compatibles con los canales FAM y HEX/VIC.
Antes de utilizar el producto debe comprobarse:
- La compatibilidad del equipo con el canal FAM.
- La compatibilidad con el canal HEX o VIC cuando se utilice control interno.
- El volumen de reacción admitido.
- El tipo de tubo, placa o consumible requerido.
- La posibilidad de programar la etapa de retrotranscripción.
- La compatibilidad con el programa térmico indicado en el IFU.
Controles del ensayo
Cada ejecución debe incorporar los controles necesarios para verificar el funcionamiento correcto del análisis:
- Control positivo de amplificación.
- Control negativo de amplificación.
- Control negativo de extracción, cuando proceda.
- Control interno de extracción o amplificación, cuando se utilice.
- Muestras objeto de análisis.
La ejecución únicamente debe considerarse válida cuando los controles cumplen los criterios establecidos en las instrucciones de uso y en los procedimientos internos del laboratorio.
Interpretación de resultados
La presencia o ausencia del objetivo debe evaluarse mediante el análisis de las curvas de amplificación y la comparación con los controles del ensayo.
La interpretación debe considerar:
- La amplificación correcta del control positivo.
- La ausencia de señal específica en el control negativo.
- La forma y consistencia de la curva de amplificación de la muestra.
- El valor de Cq obtenido.
- El comportamiento del control interno, cuando se utilice.
- Los criterios de aceptación definidos por el laboratorio.
- Las instrucciones y límites establecidos en el IFU.
Un resultado debe considerarse válido únicamente cuando todos los controles cumplen los criterios establecidos.
Conservación
Conservar el producto siguiendo las indicaciones incluidas en la etiqueta y en las instrucciones de uso.
Para el formato liofilizado se prevé una conservación refrigerada entre 2 y 8 °C.
No exponer los reactivos a humedad, luz directa o temperaturas elevadas durante periodos prolongados.
LoopSense™ Q CYVCV se comercializa exclusivamente para Research Use Only — RUO. No está destinado a diagnóstico clínico.
Preguntas frecuentes
¿Qué es CYVCV?
CYVCV es la abreviatura de Citrus yellow vein clearing virus, un virus de RNA asociado a la enfermedad conocida como clorosis nervial amarilla de los cítricos.
Su nombre taxonómico aceptado es Potexvirus citriflavivenae.
¿Qué síntomas produce CYVCV?
Puede provocar aclaramiento amarillo de los nervios, deformación de hojas, arrugamiento, reducción del vigor y alteraciones en los frutos.
La intensidad de los síntomas puede depender de la especie, variedad, edad de la planta, condiciones ambientales y concentración viral.
También pueden existir plantas infectadas sin síntomas evidentes.
¿Qué cítricos pueden analizarse?
El kit está destinado al análisis de limonero, lima, naranjo, mandarino, pomelo, naranjo amargo, portainjertos y otros cítricos.
Cada laboratorio debe verificar el comportamiento del ensayo en las especies, variedades y matrices que analice habitualmente.
¿Se pueden analizar plantas sin síntomas?
Sí. La RT-qPCR permite detectar RNA viral en plantas que no presentan síntomas visibles, siempre que la concentración del virus sea suficiente y la toma de muestra resulte representativa.
¿El kit incluye extracción de RNA?
No. LoopSense™ Q CYVCV se utiliza con RNA vegetal previamente extraído y purificado.
Crilyo puede suministrar soluciones de extracción compatibles por separado.
¿Qué canal utiliza el kit?
La detección de CYVCV se realiza en el canal FAM.
El control interno, cuando está incluido en el formato seleccionado, se analiza en el canal HEX o VIC.
¿Es compatible con mi equipo de PCR?
El kit es compatible con equipos de PCR en tiempo real que dispongan de los canales FAM y, cuando proceda, HEX o VIC.
Antes de utilizarlo debe comprobarse la compatibilidad óptica, el volumen de reacción, el programa térmico y el tipo de consumible admitido por el equipo.
¿Es un producto de diagnóstico oficial?
No. LoopSense™ Q CYVCV es un producto destinado exclusivamente a investigación — RUO.
Las decisiones fitosanitarias oficiales deben basarse en la normativa aplicable y en los procedimientos establecidos por las autoridades competentes.
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