Detección molecular de PepMV mediante RT-qPCR
LoopSense™ Q PepMV es un kit molecular diseñado para la detección cualitativa de Pepino mosaic virus (PepMV) mediante RT-qPCR en tiempo real.
PepMV es un virus relevante en el análisis sanitario del cultivo de tomate. La detección molecular permite estudiar su presencia incluso cuando los síntomas son leves, variables o no permiten diferenciar con claridad el agente implicado.
El kit utiliza primers específicos, una sonda fluorescente con lectura en el canal FAM y reactivos en formato liofilizado para facilitar la preparación rutinaria de las reacciones.
Características principales
- Detección cualitativa de PepMV.
- Tecnología One-Step RT-qPCR.
- Retrotranscripción y amplificación integradas en un único programa.
- Detección mediante sonda fluorescente específica.
- Lectura de fluorescencia en el canal FAM.
- Reactivos específicos en formato liofilizado.
- Programa de amplificación simplificado.
- Compatible con termocicladores qPCR de plataforma abierta.
- Adecuado para el análisis de material vegetal.
- Disponible en diferentes formatos de reacciones.
- Uso exclusivo para investigación.
Uso previsto
LoopSense™ Q PepMV está destinado a la detección cualitativa de RNA de Pepino mosaic virus en extractos procedentes de muestras vegetales.
El kit puede integrarse en:
- Actividades de investigación en virología vegetal.
- Análisis de plantas de tomate con síntomas compatibles.
- Evaluación de material vegetal aparentemente asintomático.
- Control de plantas madre, semilleros y material de propagación.
- Estudios de presencia y distribución del virus.
- Programas internos de vigilancia de patógenos vegetales.
- Estudios de coinfección con otros virus del tomate.
Tipos de muestra
El ensayo está destinado al análisis de RNA previamente extraído de material vegetal.
Las matrices pueden incluir:
- Hojas.
- Brotes.
- Cotiledones.
- Plántulas.
- Tejidos vegetales de plantas sintomáticas o aparentemente asintomáticas.
- Otros materiales vegetales previamente evaluados por el laboratorio.
El sistema de extracción de ácidos nucleicos no está incluido y debe seleccionarse de acuerdo con la matriz y el flujo de trabajo utilizado.
Flujo de trabajo
- Extracción de RNA de la muestra vegetal.
- Preparación de la reacción conforme a las instrucciones de uso.
- Ejecución del programa de RT-qPCR.
- Adquisición de fluorescencia en el canal FAM.
- Validación del comportamiento de los controles.
- Interpretación de las curvas de amplificación y de los valores de Cq.
Tecnología RT-qPCR
PepMV posee un genoma de RNA, por lo que el ensayo incluye una etapa inicial de transcripción inversa para generar ADN complementario.
A continuación, el objetivo se amplifica mediante PCR en tiempo real utilizando primers y una sonda fluorescente específica.
La señal correspondiente al objetivo se registra en el canal FAM durante la fase de adquisición definida en el programa térmico.
Controles del ensayo
Cada ejecución debe incorporar los controles necesarios para verificar el funcionamiento correcto del análisis:
- Control positivo de amplificación.
- Control negativo de amplificación.
- Control negativo de extracción, cuando proceda.
- Control interno de extracción o amplificación, cuando se utilice.
- Muestras objeto de análisis.
La ejecución solamente debe considerarse válida cuando los controles cumplen los criterios establecidos en el IFU y en los procedimientos internos del laboratorio.
Presentación del producto
LoopSense™ Q PepMV se suministra con reactivos específicos liofilizados para la retrotranscripción, amplificación y detección del objetivo.
El número de reacciones, controles y componentes incluidos depende de la referencia seleccionada.
El formato liofilizado facilita la preparación de la reacción, reduce la manipulación de reactivos y contribuye a la estandarización del flujo de trabajo.
Compatibilidad
El kit puede utilizarse en termocicladores de PCR en tiempo real de plataforma abierta que cumplan los siguientes requisitos:
- Compatibilidad con el canal FAM.
- Posibilidad de programar una etapa de retrotranscripción.
- Configuración independiente de las etapas de amplificación.
- Compatibilidad con el volumen de reacción indicado.
- Compatibilidad con el tipo de tubo, placa o consumible especificado.
Interpretación de resultados
La presencia o ausencia del objetivo debe evaluarse mediante el análisis de las curvas de amplificación y la comparación con los controles del ensayo.
La interpretación debe considerar:
- La amplificación correcta del control positivo.
- La ausencia de señal específica en el control negativo.
- La forma y consistencia de la curva de amplificación.
- El valor de Cq obtenido para cada muestra.
- El comportamiento del control interno, cuando se utilice.
- Los criterios de aceptación definidos por el laboratorio y el IFU.
Un resultado debe considerarse válido únicamente cuando todos los controles cumplen los criterios establecidos.
Producto destinado exclusivamente a investigación — Research Use Only (RUO). No destinado a diagnóstico clínico.
Documentación técnica
Consulta las instrucciones de uso para conocer la preparación de la reacción, el programa térmico, los controles y los criterios de interpretación.
Preguntas frecuentes
¿PepMV se analiza mediante qPCR o RT-qPCR?
PepMV debe analizarse mediante RT-qPCR porque su material genético es RNA. El ensayo incorpora una etapa inicial de transcripción inversa antes de la amplificación.
¿Qué muestras pueden analizarse?
Pueden analizarse extractos de material vegetal preparados mediante un procedimiento compatible con RT-qPCR y previamente evaluados o validados por el laboratorio.
¿Qué canal debe seleccionarse?
La señal fluorescente correspondiente al objetivo se registra en el canal FAM.
¿El kit incluye el sistema de extracción?
No. El RNA debe extraerse previamente mediante un procedimiento adecuado para la matriz vegetal analizada.
¿Puede utilizarse en cualquier termociclador?
Puede utilizarse en equipos qPCR de plataforma abierta compatibles con el canal FAM, el programa térmico, el volumen de reacción y el consumible indicados en las instrucciones de uso.
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