Detección molecular de TSWV en muestras vegetales
LoopSense™ Q TSWV es un ensayo molecular de RT-qPCR diseñado para la detección cualitativa de Tomato spotted wilt virus (TSWV) mediante amplificación en tiempo real.
TSWV puede afectar a numerosas especies vegetales, incluyendo cultivos hortícolas y ornamentales. La expresión de la infección puede variar en función del hospedador, el estado fisiológico de la planta y las condiciones de cultivo.
La detección molecular permite estudiar la presencia del virus mediante la amplificación de una región genética específica, facilitando el análisis de material vegetal sintomático o aparentemente asintomático.
Los reactivos se suministran en formato liofilizado para reducir los pasos de manipulación y facilitar la preparación rutinaria de las reacciones.
Características principales
- Detección cualitativa de TSWV.
- Tecnología One-Step RT-qPCR.
- Retrotranscripción y amplificación en un único programa.
- Sonda fluorescente específica.
- Lectura de fluorescencia en el canal FAM.
- Reactivos específicos en formato liofilizado.
- Programa de amplificación estandarizado.
- Compatible con plataformas qPCR abiertas.
- Adecuado para investigación sobre patógenos vegetales.
- Disponible en diferentes formatos de reacciones.
- Uso exclusivo para investigación.
Uso previsto
LoopSense™ Q TSWV está destinado a la detección cualitativa de RNA de Tomato spotted wilt virus en extractos procedentes de material vegetal.
El producto puede integrarse en:
- Programas de investigación en virología vegetal.
- Análisis de plantas con síntomas compatibles.
- Evaluación de material vegetal aparentemente asintomático.
- Control de plantas madre, semilleros y material de propagación.
- Estudios epidemiológicos y de distribución del virus.
- Investigaciones sobre transmisión y coinfecciones.
- Programas internos de vigilancia de patógenos vegetales.
Tipos de muestra
El ensayo está destinado al análisis de RNA previamente extraído de material vegetal. Las matrices pueden incluir hojas, brotes, flores, pecíolos, plántulas y otros tejidos definidos por el laboratorio.
El kit de extracción no está incluido y debe seleccionarse de acuerdo con el tipo de muestra, la matriz vegetal y el procedimiento interno del laboratorio.
Preparación de las muestras
La preparación de las muestras y la extracción de RNA deben realizarse mediante procedimientos compatibles con la amplificación por RT-qPCR.
La calidad del resultado puede depender de:
- La representatividad del material vegetal analizado.
- La correcta conservación y manipulación de la muestra.
- La eficiencia del procedimiento de extracción.
- La calidad y concentración del RNA obtenido.
- La ausencia de inhibidores de la retrotranscripción o amplificación.
- La incorporación de controles adecuados.
Tecnología RT-qPCR
TSWV posee un genoma de RNA, por lo que el ensayo incluye una etapa inicial de transcripción inversa para generar ADN complementario.
Posteriormente, el objetivo se amplifica mediante PCR en tiempo real utilizando primers y una sonda fluorescente específica.
La fluorescencia correspondiente al objetivo se registra en el canal FAM durante la fase de adquisición indicada en las instrucciones de uso.
Controles del ensayo
Cada ejecución debe incorporar los controles necesarios para verificar el funcionamiento correcto del análisis:
- Control positivo de amplificación.
- Control negativo de amplificación.
- Control negativo de extracción, cuando proceda.
- Control interno de extracción o amplificación, cuando se utilice.
- Muestras objeto de análisis.
La ejecución solamente debe considerarse válida cuando todos los controles cumplen los criterios de aceptación establecidos en el IFU y en los procedimientos internos del laboratorio.
Presentación del producto
LoopSense™ Q TSWV contiene reactivos específicos liofilizados para la retrotranscripción, amplificación y detección del objetivo.
El número de determinaciones, controles y componentes incluidos depende del formato seleccionado.
El formato liofilizado facilita la preparación de la reacción, reduce la manipulación de reactivos y contribuye a la estandarización del flujo de trabajo.
Compatibilidad
El kit puede utilizarse en termocicladores de PCR en tiempo real de plataforma abierta que cumplan los siguientes requisitos:
- Compatibilidad con el canal FAM.
- Posibilidad de programar una etapa de retrotranscripción.
- Configuración independiente de las etapas de amplificación.
- Adquisición de fluorescencia durante el paso indicado en el IFU.
- Compatibilidad con el volumen de reacción y el tipo de consumible especificados.
Interpretación de resultados
La presencia o ausencia del objetivo debe evaluarse mediante el análisis de la curva de amplificación de cada muestra y la comparación con los controles del ensayo.
La interpretación debe considerar:
- La amplificación correcta del control positivo.
- La ausencia de amplificación específica en el control negativo.
- La forma y consistencia de la curva de amplificación.
- El valor de Cq obtenido para la muestra.
- El comportamiento del control interno, cuando se utilice.
- Los criterios de aceptación definidos por el laboratorio y el IFU.
Un resultado debe considerarse válido únicamente cuando los controles cumplen los criterios establecidos.
Producto destinado exclusivamente a investigación — Research Use Only (RUO). No destinado a diagnóstico clínico.
Documentación técnica
Consulta las instrucciones de uso para conocer la preparación de la reacción, el programa térmico, los controles y los criterios de interpretación.
Preguntas frecuentes
¿Qué detecta LoopSense™ Q TSWV?
Detecta material genético específico de Tomato spotted wilt virus mediante una reacción de RT-qPCR en tiempo real.
¿Por qué incluye una etapa de retrotranscripción?
TSWV posee un genoma de RNA. Por este motivo, el material genético viral debe convertirse inicialmente en ADN complementario antes de realizar la amplificación por PCR.
¿En qué canal se realiza la lectura?
La señal fluorescente correspondiente al objetivo se registra en el canal FAM durante el paso de adquisición establecido en el programa térmico, habitualmente en la fase de 60 °C.
¿El kit incluye el sistema de extracción?
No. El RNA debe extraerse previamente mediante un procedimiento adecuado para la matriz vegetal analizada.
¿Puede utilizarse en cualquier termociclador?
Puede utilizarse en equipos qPCR de plataforma abierta compatibles con el canal FAM, el volumen de reacción, el consumible y el programa térmico indicados en las instrucciones de uso.
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