Kits de extracción de ADN y RNA mediante columnas de sílica
Los kits Spin Column de Crilyo™ están diseñados para la extracción y purificación de ADN o RNA mediante tecnología de columnas de sílica.
El sistema permite obtener ácidos nucleicos de elevada pureza y compatibles con aplicaciones posteriores de biología molecular, investigación y control de calidad.
La gama incluye soluciones específicas para diferentes tipos de muestra, como tejidos vegetales, suelo, bacterias, hongos, virus y otras matrices biológicas complejas.
Los protocolos están optimizados para maximizar el rendimiento de extracción y reducir la presencia de inhibidores que puedan afectar a las técnicas posteriores de amplificación o análisis molecular.
Tecnología Spin Column
Los kits utilizan membranas de sílica capaces de retener selectivamente los ácidos nucleicos en presencia de las condiciones químicas adecuadas.
El proceso de extracción se basa en cuatro etapas principales:
- Lisis de la muestra y liberación de los ácidos nucleicos.
- Unión del ADN o RNA a la membrana de sílica.
- Lavado para eliminar proteínas, sales, inhibidores y otros contaminantes.
- Elución del ácido nucleico purificado.
El formato basado en columnas facilita un flujo de trabajo sencillo, reproducible y fácil de incorporar a laboratorios que realizan extracciones manuales.
Características principales
- Tecnología de purificación mediante columnas de sílica.
- Extracción de ADN o RNA de elevada pureza.
- Protocolos específicos según el tipo de muestra.
- Compatible con tejidos vegetales, suelo, bacterias, hongos y virus.
- Eliminación eficiente de inhibidores presentes en matrices complejas.
- Protocolos rápidos y fáciles de implementar.
- Procesamiento manual mediante tubos de microcentrífuga.
- Buena reproducibilidad entre muestras y ejecuciones.
- Extractos compatibles con aplicaciones moleculares de alta sensibilidad.
- Adecuado para laboratorios de diagnóstico, investigación y control fitosanitario.
Tipos de ácidos nucleicos
Según la referencia seleccionada, los kits Spin Column de Crilyo™ pueden utilizarse para:
- Extracción de ADN genómico.
- Extracción de ADN vegetal.
- Extracción de ADN microbiano.
- Extracción de ADN a partir de suelo.
- Extracción de RNA total.
- Extracción de RNA vegetal.
- Extracción de RNA viral.
- Purificación de ácidos nucleicos a partir de lisados previamente preparados.
Tipos de muestra
La gama incluye soluciones para diferentes matrices biológicas:
- Hojas, raíces, tallos, frutos y otros tejidos vegetales.
- Semillas y material vegetal de propagación.
- Muestras de suelo.
- Suspensiones obtenidas a partir de suelo o raíces.
- Bacterias y cultivos bacterianos.
- Hongos, micelio y esporas.
- Levaduras.
- Muestras con presencia de virus.
- Muestras alimentarias.
- Agua y muestras ambientales.
- Hisopos y suspensiones celulares.
- Otras matrices previamente verificadas por el laboratorio.
Cada tipo de muestra debe procesarse mediante el protocolo y la referencia de kit adecuados.
Extracción de muestras vegetales
Las muestras vegetales pueden contener polisacáridos, polifenoles, pigmentos y otros compuestos capaces de inhibir la PCR o las reacciones enzimáticas posteriores.
Los protocolos para plantas están diseñados para favorecer la lisis del tejido y reducir la presencia de estos contaminantes durante las etapas de lavado.
El rendimiento final puede depender de:
- La especie vegetal.
- El tipo y edad del tejido.
- La cantidad inicial de muestra.
- La correcta homogeneización.
- El contenido en compuestos secundarios.
- El procedimiento de conservación de la muestra.
Extracción de muestras de suelo
El suelo es una matriz compleja que puede contener ácidos húmicos, materia orgánica, minerales y otros compuestos inhibidores.
Los kits destinados a suelo incorporan procedimientos específicos para facilitar la recuperación de ADN y reducir la presencia de sustancias que pueden afectar a la amplificación.
La eficacia del proceso depende de la composición del suelo, la carga microbiana, la cantidad de muestra y el grado de homogeneización.
Extracción de bacterias y hongos
Los kits Spin Column pueden utilizarse para la purificación de ácidos nucleicos a partir de cultivos bacterianos, micelio, esporas y otras preparaciones microbiológicas.
Algunas especies pueden requerir tratamientos adicionales de lisis mecánica, térmica o enzimática para romper correctamente la pared celular.
El método de pretratamiento debe seleccionarse de acuerdo con el microorganismo y la aplicación posterior.
Extracción de RNA y virus
Las referencias destinadas a RNA incorporan reactivos y condiciones diseñadas para reducir la degradación y favorecer la recuperación de RNA total o viral.
Durante la extracción de RNA deben adoptarse medidas para evitar la contaminación con RNasas:
- Utilizar consumibles libres de RNasas.
- Trabajar con guantes limpios.
- Evitar tiempos prolongados a temperatura ambiente.
- Conservar las muestras de forma adecuada.
- Procesar el RNA purificado según las recomendaciones del protocolo.
Flujo de trabajo
- Preparar y homogeneizar la muestra.
- Añadir el tampón de lisis y los reactivos indicados.
- Incubar o realizar el pretratamiento correspondiente.
- Transferir el lisado a la columna de sílica.
- Centrifugar para permitir la unión del ADN o RNA.
- Realizar los lavados indicados en el protocolo.
- Eliminar los restos de tampón de lavado.
- Añadir el tampón de elución.
- Recuperar el ácido nucleico purificado.
- Utilizar el extracto en la aplicación molecular correspondiente.
Aplicaciones posteriores
Los ácidos nucleicos obtenidos pueden utilizarse en técnicas como:
- PCR convencional.
- RT-PCR.
- qPCR.
- RT-qPCR.
- LAMP.
- RT-LAMP.
- Secuenciación.
- Genotipado.
- Clonación.
- Detección de patógenos.
- Control de calidad molecular.
- Investigación y desarrollo de ensayos.
Integración con LoopSense™
Los kits Spin Column de Crilyo™ pueden utilizarse para preparar muestras destinadas a los ensayos LoopSense™ Q y LoopSense™ LAMP.
El flujo de trabajo puede incluir:
- Preparación y homogeneización de la muestra.
- Extracción de ADN o RNA mediante columna de sílica.
- Elución del ácido nucleico purificado.
- Preparación de la reacción LoopSense™.
- Amplificación mediante qPCR, RT-qPCR, LAMP o RT-LAMP.
- Interpretación de los resultados.
La compatibilidad debe verificarse teniendo en cuenta la matriz, el volumen de elución, la concentración del extracto y la posible presencia de inhibidores.
Ventajas de las columnas de sílica
- Flujo de trabajo sencillo y ampliamente estandarizado.
- No requiere equipamiento automático de extracción.
- Permite procesar muestras individuales o pequeños lotes.
- Facilita la incorporación de diferentes protocolos según la matriz.
- Proporciona extractos compatibles con múltiples aplicaciones.
- Permite controlar manualmente cada etapa del proceso.
- Adecuado para laboratorios con volúmenes bajos o medios de muestras.
Consumibles y equipamiento necesario
Según la referencia y el protocolo, el procedimiento puede requerir:
- Columnas de sílica y tubos colectores.
- Tampones de lisis, unión, lavado y elución.
- Microcentrífuga compatible.
- Tubos de microcentrífuga.
- Puntas con filtro.
- Homogeneizador, molino o sistema de trituración.
- Proteinasa K, enzimas de lisis o reactivos adicionales cuando proceda.
- Etanol u otros componentes indicados en el protocolo.
Consideraciones de uso
El rendimiento y la pureza del extracto dependen de la matriz, la cantidad inicial de muestra, el procedimiento de lisis y el cumplimiento del protocolo.
Antes de incorporar una nueva matriz, el laboratorio debe verificar:
- La eficacia de la homogeneización y la lisis.
- La capacidad de la columna.
- El rendimiento de recuperación de ADN o RNA.
- La pureza del extracto.
- La ausencia de inhibición en la técnica posterior.
- El volumen de elución adecuado.
- La estabilidad del ácido nucleico obtenido.
- La reproducibilidad entre muestras y ejecuciones.
Cada serie de extracción debe incorporar controles adecuados para identificar posibles contaminaciones, pérdidas de muestra o inhibición.
Producto destinado exclusivamente a investigación, control de calidad y uso profesional de laboratorio — Research Use Only (RUO).
Preguntas frecuentes
¿Qué tecnología utilizan los kits Spin Column?
Utilizan membranas de sílica que retienen selectivamente el ADN o RNA durante la extracción. Los contaminantes se eliminan mediante lavados y el ácido nucleico se recupera mediante elución.
¿Sirven para extraer ADN y RNA?
Sí. Existen referencias específicas para ADN, RNA y diferentes tipos de muestra. Debe seleccionarse el kit adecuado para la aplicación prevista.
¿Pueden utilizarse con muestras vegetales?
Sí. La gama incluye protocolos para hojas, raíces, semillas y otros tejidos vegetales, diseñados para reducir la presencia de polisacáridos, polifenoles y otros inhibidores.
¿Pueden utilizarse con muestras de suelo?
Sí. Existen soluciones específicas para suelo que incorporan etapas destinadas a reducir ácidos húmicos y otros compuestos capaces de inhibir la amplificación.
¿Necesitan una centrífuga?
Sí. Los protocolos Spin Column requieren generalmente una microcentrífuga para realizar las etapas de unión, lavado, secado y elución.
¿Son compatibles con sistemas automáticos?
Los kits Spin Column están diseñados principalmente para extracción manual. Para automatización se recomienda utilizar kits basados en bolas magnéticas.
¿Los extractos pueden utilizarse con LoopSense™?
Sí. El ADN o RNA purificado puede utilizarse en kits LoopSense™ Q y LoopSense™ LAMP, siempre que el procedimiento de extracción haya sido verificado para la matriz y el ensayo correspondiente.
¿Qué aplicaciones posteriores son compatibles?
Los extractos pueden utilizarse en PCR, RT-PCR, qPCR, RT-qPCR, LAMP, RT-LAMP, secuenciación y otras técnicas de biología molecular.
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